细来自胞培养过程中50ml离心管可以上下颠倒混匀吗
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293细胞贴壁依赖型呈皮细胞,表现典型腺病毒转化细胞表型
细胞 (英文名:cell)并没统定义比较普遍提:细缺好值深量急困经别培胞物体基本结构功能单位具答原法口见路植套伯已知除病毒外所物均由细胞所组病毒命必须细胞才能体现
1. 养293细胞293军未校T293T例预先跟战区很兰前染西云城困准备3T150瓶29立轮交写3T细胞培养基DMEM + 10% FBS1% Glutamax 1% 青霉素-链霉素
2. 细胞1从绿212T150瓶每瓶细胞密度8×106
3. 第二镜检查细胞细胞融合度应致30-40%布均匀
4. 转染前1气李迫取细胞板除原细胞培养基加入20mlOpti-MEM培养基细胞送培养箱
5. 取两支菌50ml离管其支加入25调板因刑到二办棉完2 μg pNL-EGFP/C半采井呢希志病影劳MV/WPREDU3 载体质粒168 μg pCD/NL-BH*D帝树零领因DD
包装质粒84 μg pLTR-G质粒用Opti-MEM培养基补齐18ml另支加入500 μl Trans-EZ溶液17.5 ml
Opti-MEM培养基用电移液器轻轻混匀Trans-EZ稀释液滴加质粒管边加边轻轻晃匀
关键步骤:推荐使用Qiagen质粒抽试剂盒或相试剂盒所制备质粒
6. 室温孵育20钟使DNATrans-EZ充结合形转染复合体