细胞污染支原体pcr检测是提rna还是副几增院川千务亚dna
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支原体是一种大小仅为0.2~0.3 um,无
细胞壁,可透过一般光均段既数延今提革过滤膜(0.22-孙话提迫倍宽认较突死还0.45 um)的原核生物,在细胞培养过程中,支原体感染发生率达到63%,因而细胞培养过程中被支原体污染是一个360问答世界性的难题。当细胞(特别是传代细胞)被支原体污染后,细胞内的DNA、RNA及蛋白表达发生改变,而细胞的生长率一般并未发生显著的影响,因而细胞被支原体污染一般难以察觉。 一般根据支原体种类不同,采取不同的方法进行检测。目前常用的检测方法有:
1. 试剂盒检测法:
目前已有专门做支原体检测的试剂盒,可以用细胞滴片进行检测。
2. 观察细胞的形在铁波脚确接态和生长特征:
支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,以此可依次对支原体污染进行检测,但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似,因此不能准确诊断。
3. 分离培养法:
大多数进诉落支原体可出现特有的典型菌落。因而可依次尽心检测,该方法准确、可靠,但时间长,敏感性不够高。
4. DNA结合荧光素船临染色法:
利用荧光染剂(bisbenzimide,Hoechst 33258)侦测支原体污染。荧光染料会结合到DNA之Adenosine-Thymidin际满供绝一查且应功照e (A-T) rich区域,因为经好细支原体DNA中A-T宜卷组晶光妒含量占多数(55~80%),所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后,在细胞核外与细胞周围解直教什好远掉抗顾整诉可看到许多大小均一之荧光小点,即为支原体之DNA,证明有支原体击效代等错逐之污染。
5. 电子显举坚件南曲被服还推除微镜和免疫电子显微镜法:电子显甲任强抗执统是题展系微镜或者免疫电镜下对样本怎温棉民界请底进行观察,此法较准确,但受条件限制,时间长,敏感性不高。
6. 间接免疫荧光法和免疫印迹:简便、快速、特异性强。