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测定一个蛙红细胞膜上β-肾上腺素受体的数量,这些受体通常与肾上腺素结合并刺激腺苷酸环化酶的活性。选择一种肾上腺素的竞争性...
测定一个蛙红细胞膜上β-肾上腺素受体的数量,这些受体通常与肾上腺素结合并刺激腺苷酸环化酶的活性。选择一种肾上腺素的竞争性抑制剂alprenolol与受体结合,该抑制剂比肾上腺素与受体结合更牢固。最基本的实验方案是:将标记了的alprenolol与红细胞膜混合,37℃下温育10分钟,离心沉淀膜并测量沉淀中的放射性。用两种方式处理实验。 首先,测量与一定数量的红细胞膜结合的3H-alprenolol的增加量,以确定总的结合量。 其次,在过量的未标记的alprenolol存在的情况下重复实验,测量非特异性的结合,其结果如图14-3-8所示。
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从总结合曲线中减除非特异性结合曲线,获得特异性结合曲线。如14-3-8答案图所示。特异性结合曲线中alprenolol(ALP)的浓度在4nmol/L以上成为高的平直区,这样ALP在这一浓度以上时,β-肾上腺素受体被饱和。
$每个蛙的红细胞存在1500个β-肾上腺素受体,因为一个ALP结合一个受体,结合的ALP分子的数目相当于受体的数目。在饱和状态下每mg红细胞膜结合20000cpm的ALP(15~21)。这样,每个红细胞所结合的ALP分子数是1500。
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