细胞生物学实验中常用来固定细胞或细胞器的方法有哪些

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细胞固定化方法有:Adsorption(吸附);covalent bonding(共价结合);Cross linking(交联);Entrapment(包埋)、Encapsulation(微胶囊) 。下面对这几种做具体介绍。

一、吸附法

1,原理

利用载体和细胞表面所带电荷的静电引力(van der Walls forces),使细胞吸附于载体上。吸附法可分为物理吸附和离子吸附两种。该法操作简单,固定化过程对细胞活性影响小。

2,载体的材料

采用吸附法固定细胞,所用的载体主要有:硅藻土、木屑、多孔玻璃、活性炭、

多孔陶瓷、离子交换树脂和等。塑料

3,影响吸附固定化的因素

(1)Z-电位

(2)细胞的性质和细胞壁的组成

(3)载体的性质

(4)pH

二、共价结合法

利用细胞表面的反应基团(如氨基、羧基、羟基、巯基、咪唑基)与活化的无机或有机载体反应,形成共价键将细胞固定。用该法制备的固定化细胞一般为死细胞。

三、交联法

利用双功能或多功能试剂与细胞表面的反应基团(如氨基、羧基、羟基、巯基、咪唑基)反应,从而使细胞固定。常用的交联剂包括:戊二醛、甲苯二异氰酸酯、双重氮联苯胺。

由于交联试剂的毒性,这一方法具有一定的局限性。

四、包埋法

包埋法是细胞固定化最常用的方法。包埋法可以分为:

1,微胶囊法:利用半透性聚合物薄膜将细胞包裹起来,形成微型胶囊;

2,凝胶包埋法:是在无菌条件下,将生物细胞和胶溶液混合在一起,然后再经过相应的造粒处理,形成直径为1-4mm的胶粒。

常用的包埋剂为:聚丙烯酰胺、琼脂、海藻酸、卡拉胶、二醋酸纤维、三醋酸纤维、明胶等。

五、固定化方法的比较

吸附法:条件温和、方法简便、载体可再生。但操作稳定性差。

共价法:操作稳定性高。但由于试剂的毒性,易引起细胞的破坏。

交联法:可得到高细胞浓度,但机械强度低,无法再生,不适于实际应用。

包埋法:细胞和载体间没有束缚,固定化后,细胞仍保持较高活力。但这类方法只适用于小分子底物。


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