液相色谱柱柱效过低如何提高

柱效受外界影响的因素主要有以下2点：温度、流动相相关内容（成分、PH），对这2方面做一下调整看看效果如何，如果不行，可以尝试把柱子按流动相走向反接进行试验（不推荐，但是有时候效果很好，如果这根柱子做所有品种都有柱效低的情况，可以采用这个办法）。

换柱子 可能使用寿命到啦

色谱柱柱效过低，就必须要对柱子进行再生了，一般再生有两种办法，第一种办法要拆开柱头重新补充固定相，但这种办法不但麻烦，而且有时操作不当会使柱子报废。所以一般先采用第二种办法法，就是冲洗再生。 1 反相色谱柱的清洗和再生 反相色谱法是当今液相色谱法中应用最广泛的一种技术，它能分析非极性、可离子化和离子化样 品，应用比例超过90％．随着HPLC技术的发展，色谱柱的种类也越来越多，除经典的键合硅胶固定相填充柱，还有如聚合物填充柱、聚合物整体柱及以氧化锆基质固定相为代表的其它无机基质固定相色谱柱．这些色谱柱因其固定相基质差异，具有不同的物理和化学性质及应用范围，其清洗与再生方式也存在一定差别． 1．1 硅胶基质反相色谱柱的清洗与再生 在反相色谱中，硅胶基质色谱柱使用比例达70％ ，被应用于各种样品的分析．清洗硅胶基质反相 色谱柱，关键是弄清楚污染物的性质，并且能找到合适的溶剂将其洗脱．对于被不同样品污染的色谱柱，如常规样品污染、蛋白质污染及金属离子污染的色谱柱，具有对应的清洗和再生方法． 1．1．1 常规样品污染色谱柱清洗与再生方法被常规样品污染的硅胶基质反相色谱柱，已有各种清洗与再生方法．其中最常用的是用20倍柱体积(这里柱体积指色谱柱内空腔体积，表1列出了 常用规格分析柱柱体积 )的乙腈一二氯甲烷一正己烷一二氯甲烷一乙腈冲洗色谱柱 ，或者用强度 更弱的溶剂系统清洗，即：水一乙腈一氯仿(或异丙醇)一乙腈一水冲洗，其中水冲洗步骤可以省略。艾杰尔公司使用乙腈：水(5：95，WV)一四氢呋哺一乙腈：水(5：95， )冲洗10倍柱体积，此方法达到较为理想的结果，同时能大大节省时间．强酸和强碱溶液会导致硅胶基质填料溶解，但是在某些条件下使用稀酸可以将有机溶剂不能洗脱的污染物去除，如用甲醇一氯仿一甲醇冲洗20倍柱体积达不到清洗效果，可依次用20倍柱体积水、0．05 mol／L的硫酸和流动相溶液冲洗色谱柱，可取得良好效果．经过多次进样的色谱柱，用90％ ～100％ 的溶剂B(强洗脱溶剂)冲洗2O倍体积即可清除污染物l_ J．当强洗脱溶剂无法洗脱时，则有必要用更强的一种或一系列溶剂清洗，即：100％ 甲醇~-qO0％ 乙腈一乙腈： 异丙醇(75：25，V／V)一100％ 异丙醇一100％ 二 氯甲烷或100％正己烷．根据色谱柱具体使用情况，在清洗过程中可省略一个或多个有机溶剂除了以上这些方法之外，还有一些使用更强溶剂、耗费时间较短的方法．依利特公司月j 20倍柱体积的二氯甲烷： 甲醇(96：4，V／V)，加1％氢氧化铵冲洗，其中加入的氢氧化铵对聚集在柱头的污染物具有良好的清洗效果．二氯甲砜也被Themo公司用于色谱柱的清洗，具体方法是：在用水冲洗色谱柱同时进4等份的200 L二氯甲砜，然后依次用甲醇、氯仿和甲醇冲洗．用N，N一二甲基甲酰胺、丙酮依次冲洗色谱柱，可将色谱柱柱效提高约50％ to]．这些方法耗时短，但使用的特殊溶剂，如氢氧化铵、二氯甲砜、N，N一二甲基甲酰胺等，均对色谱固定相有一定损伤． 当色谱柱被严重污染，可在低于0．5 mL／min的流速下用二甲基亚砜(DMSO)或50％二甲基甲酰胺一水冲洗色谱柱 ．实验证明在线清洗与再生的方法对非严重污染色谱柱非常有效，对污染特别严重的色谱柱不能达到理想效果，需将固定相从色谱柱内取出，进行清洗再生后重新装填．具体操作是：将色谱固定相从色谱柱内打出后，用甲醇浮选，去除其中细小的破碎颗粒；然后用二甲基甲酰胺、丙酮、甲醇超声清洗；最后70 c【=水浴蒸干固定相，重新装填色谱柱．经该方法处理的色谱柱，性能可得到显著提高 · 由上述方法可以看出，一般清洗方法所用的溶剂系统，溶剂洗脱强度均逐渐增加，使用强疏水性溶剂(如氯仿和正己烷)溶解非极性物质如类脂和油类，这类物质往往是色谱柱污染的最主要原因．正如正相与反相系统替换时，必须使用过渡溶剂冲洗系统，在色谱柱清洗与再生过程中，也必须保证一系列溶剂中每种溶剂都均与下一个溶剂互混．异丙醇能与正己烷或二氯甲烷互溶，又与水相溶剂互溶，常在清洗过程中用作过渡溶剂．但是异丙醇粘度非常大，需使用较低的流速以免导致泵压过高．而使用过渡剂，清洗步骤繁琐，正如Majors所说：这是一个繁杂而又非常耗时的过程 j．此时利用梯度系统进行过夜操作是最好的选择，但梯度操作的系统要求更高，对一个复杂的清洗方法往往需要四元甚至五元梯度系统． 2 正相色谱柱的清洗与再生 通常正相色谱柱的清洗与再生方法与反相色谱柱用极性逐渐减弱的溶剂系统冲洗相反，其用极性 逐渐增强的溶剂系统冲洗¨ ．根据Themo公司研究，硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按以下方法冲洗：3一甲基戊烷或己烷一三氯乙烷一乙酸乙脂一丙酮一乙醇一水，然后以这些溶剂逆序冲洗，最后以流动相平衡．该方法从非极性溶剂缓慢过渡至极性溶剂水，然后逆序冲洗至非极性溶剂，对色谱柱损伤小，且具有良好的再生效果．然而该方法耗时长，消耗溶剂多，在很多时候应用较少，因此在具体应用过程中可省略其中一种或几种溶剂．Agilent公司使用的方法更简洁，用甲醇：氯仿(50：50， )一乙酸乙酯反冲色谱柱，然后再按正方向用流动相平衡．常规硅胶或硅胶基质正相色谱柱，也可依次以四氢呋喃、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷和无苯正己烷冲洗40～ 60倍柱体积¨ ，或用5％ ～95％ 乙腈水溶液的60min梯度清洗，然后用30 mL含2．5％二甲氧基丙烷和2．5％ 冰醋酸的正己烷溶液冲洗色谱柱，除去硅胶上吸附的水(艾杰尔公司)．对强惰性的石墨化碳和有机聚合物正相柱，可以使用一些强酸或强碱清洗．Shodex及Themo公司用的稀酸和稀碱结合清洗法，可将有机聚合物正相柱上大部分污染物洗脱：5 mL水一60 mL的0．1tool／L HC10 水溶液一5 mL水— 0 mL的0．1 mol／LNaOH水溶液一5 mL H，O在0．5 mL／min流速下反向冲洗．使用0．1 mol／L盐酸与有机溶剂结合清洗石墨化碳柱，也具有良好的再生效果：二氯甲烷、甲醇、水、0．1 mol／L盐酸、水、甲醇、二氯甲烷，最后用0流动相冲冼至平衡． 对于是不同的色谱柱冲洗方法都不一样，所以在再生操作前，一定要查到相关的专著再进行。

可以使用开管柱

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