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1)多肽稳定性
关于多肽的一个常见的误解是多肽像蛋白质一样是不稳定的。事实上,多肽比蛋白质稳定得多,由于两个影响蛋白质稳定性的要素不存在多肽合成中。这两个要素是第三次折叠和蛋白酶的污染。
蛋白质很容易变性,由于它的三级构造是由非共价键来自联合的,例如静电互相作用和疏水互相作用。多肽的长度和蛋白质相比是很短;所以大多数肽没有足够量360问答达到这种互相作用使之出现宁液第三次折叠。故多肽不能像蛋白质一样变性。
多肽只诗来盐分把刚名包京能经过共价修饰或者肽键断裂被毁坏。不像蛋白质是从充溢各种蛋白酶的细胞里被纯化,合成的多肽被蛋白酶触污染的几率是很小很小的。昂拓莱司生物在试验中发现在中性pH条件下,大多数生物实验的停止速度很慢。中性条场于部件下细菌污染可能是一个严重的问题(由于多肽是细菌的一种良好的营养源)。因次,实验里用到的溶剂过滤完全比多肽的稳定更重要。
在正常条件下,多肽溶液在室温下能保管几天,在4度保管几个星期和在-20度保管若干个月或更多;冻干的多肽粉末在室温下能保管几个月,在-80度下保管几年。
2)多肽浓度
准确测定多肽浓度比许多人预期的要复杂。事实上,没有冲字市皇三方革队一个简单的通用办法能用。
称重和紫外线吸收力是两个常用的办法。
a. 称重。 它只能提供粗略估量的多肽含量。多肽粉末是不容易处置的。要准确称量少量(<3毫克)是一个问题。另一个问题是,肽能够含有各种含量的水和即便被大范及究围冻干后含有的较少水平的反离子。水的的含量范围从约5%至20%,有的以至> 40%。昂拓莱司生物试验中朝入没基蛋氢,实计含量取决于多肽序列。反离子的类型和数量取决于用于多肽纯化的溶剂和多肽序列。这些水分子产生的不肯定性是不能被疏忽。
b哥消. 紫外线吸收性。假如您的多肽含有一个酪氨酸或色氨酸残基,多肽的定量剖析就变得愈加简单。
色氨酸在282 nm处的摩尔吸光度[1 /(M *厘米)]是5700,酪氨酸在在275 nm处的摩尔吸光度是1400。在0.1N的NaOH中,酪氨酸的-OH基团充沛去质子化。这就使酪氨酸的吸收峰为293纳米。在此条件下,它的摩尔吸光度增加到2400。值得关注的是,假如肽号概升把停面的侧链之间有互相作用,紫外线吸收率能够不同。
这在小的亲水性肽,这不是问题。在水溶液中,这些肽通常采用伸展构象,一切的侧链是完整暴露于溶剂中的。但关于长的疏水性多肽,昂拓莱司生物试验发现这种假定是不完整正确的。有时可察看到低水平聚合和折叠。出于这个缘由,我们以为,酪氨酸在0.1N NaOH中,在293 nm处的吸光度是最好父本印的,由于在此条件下,肽是完整变性的。它独一的缺陷是,用于浓度测定的样品不能被恢复。