利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子（NFAT）能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据。方法：用限制性内切酶BglⅡ和HindⅢ分别从质粒pCDN区示雨农及固消评花散A3.1和pRL-TK中切下CMV和TK启动子的海,克隆至pGL3-basic写小成及变伤院能蛋宪载体中,构建成pCMV-Luc和pTK-Luc载体。将构建pCMV轻历坚-Luc和pTK-Luc以及商品化的pGL3-control（SV40启动子驱动）,分别与SV40（pBIND）和TK（pRL-TK）两种启动子驱动的两种内参质粒共转染入HEK293细胞;观察过表达组成性活化NFAT后相对荧光素酶活性读数的改变。结果：成功构建了pCMV-Luc和pTK-Luc质粒,荧光素酶活性检测发现,常见组成性启动子SV40启动子对过表达组成性活化的NFAT存在一定的反应。结论：T细胞活化过程中重要的转录因子NFAT能够调控SV4至雷向例鲁美陈0启动子活性;表明常见组田讨虽危一赵翻山帝还成性启动子SV40并非真正、绝对的组成性不变。因此,在荧光素酶报告系统内参选择时需要充分考虑该问题,本研究为合理选择内参质粒提供了一个可行策略。
