金标法:又称任边亚重预个民胶体金法、一步法,医学上的名称为斑360问答点免疫金渗滤试验。血影爱艺径沙弦坏.金标法是一种常用的标记技术,是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。
金标法是国析酒消需冲神答让率宜局际上较为先进的体外诊断方法,近年来金王方之作标法(胶体金法)已在各种生物学研究中广泛使用,在临床使用的免疫印帮想干变案迹技术几乎都使用其标记,同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到序就既动易外底信权械。
它拥有如下几个特点:
(1)灵报州裂叫肥由春统敏度高;
(2)特异何性强;
(3)快速;
(4)简便;
(5)准确率高。
1971年faulk
和taytor将胶体金引入免疫化学,此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方罪控历磁脱转指内架法,在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法(
immunochromatogra-phy)和展花沙整境拿纸活部快速免疫金渗滤法(dot-immuogold
filtration
assay
digfa),用于检测
hbsag、hcg
和抗双链dna抗体等,具有简单、快速、准确和无污染等优点。
免疫胶体金技术的基本原理:
胶体金是由氯金酸(haucl4)在还原剂如白缩盟七维注而磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作空亚陆提南般协多用下,可聚合成一定大小的金富结女跟颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,形成带负电的疏水胶溶液,由于静电作用而成为稳定的胶体状态,故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷,帮将尔导益可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结从云文超自科振章构合是静电结合,所以不影响热宁蛋白质的生物特性。
胶体金除了与蛋白质结合以外,还可以与许多其它生物大分子结合,如spa、pha、cona等。根据胶体金的一些物理性状封限势黄照,如高电子密度、颗粒大小、形井状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。
胶体金标记,实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌a蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合,因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。
免疫金标记技术(immunogold
labelling
techique)
主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中,这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大,称之为免疫金银染色。