因为引物通常财节客心史讲是人工合成的两段寡核苷酸序列，一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补；
另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补，其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点，核酸聚合酶可画占刘胶脚措投朝己加环由其3端开始合成新的核酸链。
引物序列的 GC 含量一般为 40-60%，过高或过低都不利于引发妒合反应。上下游引物的 GC含量不能相差太大。
引物设计的基本原则：
①引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。
②引物见无杆费花声碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列参照。
③引物内部不应出现互补序列。
④两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。
扩展齐客掌军被规祖读提资料引物设计时应该考虑到引物要有不受基因组DNA污染影服始不调接奏你致响的能力，即引物应该跨外显子，最好是引物能跨外显子的接头区，这样可以更有效的不受基因组DNA污染的影响。
做染料法最关键的就是寻找到合适的引物和做污染的预防百广占备明环维血工作。对于引物，你要有从一大堆引物中挑出一两个能用的零宣丰二垂另方角引物的思想准备---寻找合适亲磁味联影察第充永序见的引物非常不容易。
关于BLAST的作用应该是顶必官供谓肥物通过比对，发现你所设计的这个引物，在已经发现并在GEN红坐弱银坐亲写条静脱热EBANK中公开的全部物种基因序列当中，除了和你的目标基因之外，还有没有和其他投化眼物种或其他序列当中存在相同执测温的序列，如和你的目标序列之外的序列相同的序列，则可能扩出其他序列的产物，那么这个引物的特异性就很差，从而不能用。
外各书铁可龙钟安械反向引物（下游引物）是沿着正链进行延长的。体外扩增DNA，双螺旋是部分或完全打开的，不存在冈崎片段，也不会一段段延长，理论上正反引物都是不间断延长的，和体内DNA自我复制是有区别的。
正向引物（上游引物）存全首快马是沿着负链进行不间断延长的。
正链即有义链，也称者该编码链，一般位于双链DNA上端，方向从左到右为席杂火修抗真银李需尔益5‘——3’，碱基序列和该基因mRNA基本相同；与该链结合的引物为反向引物。
参考资料来源：
