1、接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的不同:
直接免疫360问答荧光的实验方案通常较短,因为它只需要一个标记步骤。间接免疫荧光使用偶联二抗检测一抗会增加额外的操作步骤。
直接免疫荧光方法的实验方案步骤较少,更简单。间接免疫荧光方法中必须选择适当的二抗,增加了复杂度。这种情况在需要使用多个二抗的多色实验中尤为突出,每个二抗需要靶向不同的物种并偶知铅联至不同染料。
直接免疫荧光方法中获得的信号与间接方法相比可能较弱,因为直接方法中没有使用二抗进行信号放大。免疫荧光多个二抗结合一抗可使信号放大。
2、直接免疫荧光和间接免疫荧光染色方法的相同之处:
免疫荧光 (IF) 或细胞成像技术使用抗体将荧光染料(也称为荧操械余否雷总业视光素或荧光物)标记到特异性目标抗原上,所用荧光染料实依沉有诸如异硫氰酸荧光素 (FITC机) 等。而通过化学方法偶联荧光战益另素的抗体被广泛使用于IF章问班左甲门准策国式实验中。
根据荧光素与一抗还是二抗偶联,贺戚我们将 IF 方法分为两类:直接 IF-使用单个抗体,该抗体直接指向目的靶标,一抗与荧光素直接偶联;间接 IF-使用两个抗体,一抗未偶联,荧光素偶联的二抗指向一抗,并用于检测。
间接法测抗体基本原理:
染色程序分为两步,第一步,李么市用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒娘军往计杀久速中37℃保温30min,使抗原抗体充分结合山突华,然后洗涤,除去未结合的抗体。
第二步,加上荧光标记的引前操白饭温抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原厂的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。搭拍好
参考资料来源:百度百科——免疫荧光间接染色原理