如何进行Dynasore的生理激酶实验?求具体步骤

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Dynasore是一种可渗透细胞的,可逆的,非竞争性的dynamin(发动蛋白)抑制剂,抑制dynamin 1/2的GTPase活性,IC50为15 μM,也抑制线粒体dynamin Drp1,对其他小GTP酶没有作用效果。

GTPase 活性检测: 通过放射性实验检测GTPase活性。指定浓度的蛋白dynamin,人类Drp1在10 mM Tris (pH 7.2), 2 mM MgCl2, 和 20 μM GTPγP32 (2000 dpm/pmol) 单独或适当时候与脂质纳米管在指定时间和温度温育,最终NaCl浓度为150mM,用于高盐条件,浓度为10和20mM之间,用于低盐条件下,根据储存液中的蛋白浓度。转移10μL 等分反应试样到500 μL含酸洗涤木炭的浆中,终止GTP水解,然后离心10 min(20000×g,4°C),在含释放的P32O4的250 μL上清液中进行最后计数。

参考资料:http://www.***.cn/products/dynasore.html  


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