何谓人工染色体?酵母人工染色体与细菌人工染色体有何不同?各有哪些优缺点?
何谓人工染色体?酵母人工染色体与细菌人工染色体有何不同?各有哪些优缺点?
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人工染色体是人工构建的一类能携带大片段DNA的克隆载体。
酵母人工染色体(YAC)是一类目前能携带最大外源DNA片段的人工构建载体。含有着丝粒、端粒、酵母自主复制序列3个酵母染色体必要元件,还含有限制性内切酶位点和选择标记基因。YAC本身只有10kb,但它却能携带150~2000kb的外源DNA片段,宿主为酿酒酵母细胞。
细菌人工染色体(BAC)是继YAC之后的第二代人工染色体,以大肠杆菌质粒(F因子)为基本骨架,通常仅保留F因子的严紧型控制复制子,以及保证低拷贝质粒准确分配至子代细胞的基因位点(par基因)等基本功能的相关序列,同时也含有多克隆位点和选择性标记。它是专门为克隆大片段DNA而设计的简单质粒,可克隆长达300kb以上的外源DNA片段,宿主为大肠杆菌。YAC载体的缺陷是在YAC载体的插入片段中会出现缺失和基因重排的现象,容易形成嵌合体,与宿主细胞的染色体大小相近,很难分离。YAC的一个突出优点是,酵母细胞比大肠杆菌对不稳定的、重复的和极端的DNA有更强的容忍性。BAC不像YAC那样易发生再重组,遗传性稳定,重组DNA也易于分离。