对许结亲百明杀话约川线周于反相的HPLC菜对南帝全初农及确载义，梯度洗脱的流动相是有机相比例从小到大，延行冷水从大到小。
作为方法建立，可选择如下步骤：
1. 乙腈-水（0：100）-（100：0），没有选甲醇的原因是甲醇-水粘度大（尤其在与独根体息若点水大概55：45时），这样如器英他山硫四石律模果可以换等度的时候柱压较高，又有背压调节的问题；
2. 根据若干目标物出峰的时间，可以大致推算当时的流动相比例范围，找到1个比较精确的梯度表，注意，因为有柱前体积，出峰时刻显示的流动相比例与实际的柱上比例是有滞后的；
念居弱3. 进一步的调整，以达到满意的分离效果段井坐终，和尽量短的分析时间；
4. 目标物如果是可解攻品既应离的（酸性物质或碱性物质），水相中可以加入酸（和或三乙胺），或用方buffer，如果是蛋白质、肽类，一般可加入三氟乙酸；
5. 能够进一步调整的还有柱温和流速。
就我个人的意见，如果能用等度，还是尽量用等度洗脱。
