质粒的荧光会干扰双荧光素酶的测定么?

启动子的预测转录因子的预测报告基因质粒的构建实验方法及结果分析 用生物信息学方法分析并预测启动子区可能的转录因子结合位点。设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段，将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒（pGL3-basic）中。筛选阳性克隆，测序。扩增克隆并提纯质粒备用。扩增转录因子质粒，提纯备用。同时准备相应的空载质粒对照，提纯备用。培养293（或其它目的细胞），并接种于24孔板中，生长10-24小时（80%汇合度）。将报告基因质粒与转录因子表达质粒共转染细胞。提取蛋白并用于荧光素酶检测。加入底物，测定荧光素酶的活性。计算相对荧光强度，并与空载对照比较。