为什么免疫组化染色ABC法比SP法更灵敏

SP法:一抗+ 生物素标记二抗+ 链酶亲和素-HRP+ 辣根酶底物显色ABC法:一抗+ 生物素标记二抗+链酶亲和素-生物素-HRP+ 辣根酶底物显色主要区别也就第三步多了个生物素,生物素是怎么放大反应的?
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可以看下面这个示意图:

如果没有生物素,链霉亲和素上带有的HRP酶是有限的,因为两个蛋白都有一定的空间结构,空间位阻可能会导致蛋白的某些生物学功能丧失,所以链霉亲和素能够偶联上的HRP数量受限。但是如果用生物素标记HRP,再把生物素-HRP与链霉亲和素一起孵育,这个时候是两个蛋白被生物素这个小分子连接,一个链霉亲和素可以和4个生物素结合,假设完全理想的状态,二抗的生物素占去一个位点,还有3个位点可以结合带有生物素的HRP,也就是变成了一分子链霉亲和素带有3分子的HRP,酶量增加了,当然灵敏度也就相应的提高了。


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