正向高效液相色谱原理?反相高效液相色谱,正相分配色谱,反相分配色谱之间的关系,区别?

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色谱柱填料可以由基质直接构成,如硅胶、氧化铝、高交联度的苯乙烯-二乙烯苯或者甲基丙烯酸酯等等;也可以在这些基质的基础上涂布或化学键合固定液来构成,如:最经典的各种ODS柱、氨基柱、氰基柱等。
硅胶主要通过表面的极性硅醇基保留极性分子,属于正相分离模式。通过硅烷化技术,可以把各种不同性质的功能团(functional group)建合到硅胶表面,例如:键合十八烷基(ODS,octadecyl silane)、辛烷基、甲基、苯基增加对非极性物质分子的保留,构成反相色谱;键合带二醇基、氨基、氰基等极性基团的硅烷改善对某些极性分子的保留,构成正相色谱;键合有醚基的键合相构成中等极性的正相或反相色谱;键合强酸性磺酸型或者强碱性季铵盐型键合相,构成离子交换色谱。
正相色谱是色谱的经典形式,使用极性固定相和非极性流动相。洗脱物通过其极性基团和固定相上的极性基团作用被保留。这种应用,经典的是使用未键合的硅胶和氧化铝,但现在使用的极性键合相有以下优点:键合相平衡快,对流动相中微量的水不敏感,和产生不同的选择性。二醇基键合相比纯硅胶极性小,平衡速度快;氰基键合相是保留能力最小的正相吸附剂;氨基键合相适宜分离芳香族碳氢化合物。

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