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一般培养--维持ES细胞处于未分化状态
ES细胞培养用含有ESGRO(白血病抑制因子)的高糖培养基来阻止细胞的分化.为细胞提供包被有0.1%明胶的平板作为粘附细胞的基质.建议每2-3天从达到80%-90%融合的平板按1:8的比率传代细胞一次,细胞传代以后,在将细胞接种在0.1%明胶包被的培养皿之前,通过预先将细胞接种在没有经过包被的组织培养板2个小时,使分化细胞粘附,从而将分化和未分化细胞分开.将细胞全程置于37℃,5%CO2,100%湿度条件下培养.
培养基
ES:
配制一20×不含DMEM,HS,ESGRO的溶液(该溶液也能用于EB培养基--见下文).分装在50ml FALCON管中,(稀释为2×,每管42ml),贮存在-20℃.通过将21ml该溶液,HS和ESGRO加入450mlDMEM中制备培养基,0.2μm滤膜过滤.贮存于4℃. 注:一瓶DMEM是500ml.