过氧化氢酶CAT活性测定

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过氧化氢酶活性测定------------紫外吸收法

过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中,其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系,故常加以测定。

一、原理】

H2O2在240nm波长下有强烈吸收,过氧化氢酶能分解过氧化氢,使反应溶液吸光度(A240)随反应时间而降低。根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶的活性。

【仪器与设备与试剂】

1、材料

小麦叶片等。

2、仪器设备研钵;离心机;250ml容量瓶;移液管(0.5ml、2ml各2支);10ml试管3支;恒温水浴;紫外分光光度计;

3、试剂0.2mol/L pH7.8磷酸缓冲液(内含1%聚乙烯吡咯烷酮);

0.1mol/L H2O2(用0.1mol/L高锰酸钾标定)。

【方法】1.酶液提取:

藻液接种后每隔1d,取40ml藻液(取时需摇匀),于4℃,于8 500 r/min(10 000g)下离心10min收集藻体,用0.1mol/L、pH7.8磷酸钠缓冲液3mL重悬浮,然后用冰浴超声破碎细胞,破碎液在4℃下10200r/min离心10min,上清液即为SOD和CAT粗酶液。

2.酶活性测定

取10ml试管3支,其中2支为样品测定管,1支为空白管,按表2-14-1顺序加入试剂。

表2-14-1紫外吸收法测定H2O2样品液配置表

管 号|S1|S2|S3|管号|S0|S1|S2|

粗酶液(ml)|0.2|0.2|0.2|蒸馏水/ml|1.0|1.0|1.0|

pH7.8磷酸(ml)|1.5|1.5|1.5|

将S0号管在沸水浴煮


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