琼脂糖凝胶电泳具体操作步骤是什么?需要注意什么事项?

如何配制电泳时需要的凝胶,各种物品的比例是什么?...如何配制电泳时需要的凝胶,各种物品的比例是什么?
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这是我做病毒检测实验试剂盒的说明书部分,看是否对你有帮助: 配制1%的胶进行电泳 1 称取0.4g琼脂糖放于锥形瓶中,再量取40ml的0.5×TBE溶液混合,放于微波炉中煮沸,至溶液清彻透明为止,大约需1分40秒。 2 冷却到60℃时(放于掌心,能感觉到汤但又能忍受。)加2μl核酸染料,摇匀。 3 组装好制胶器,并调至水平。将胶倒于制胶器中,插好梳子。待40分钟胶冷却凝固后,就可放于倒好电泳缓冲液的电泳槽中进行点样。 4 取5-10μl样品溶液,加1-2μl 6×loading Dye,混合均匀后进行点样。每排点样孔要点一个5μl的Marker。 5 点完后,调电泳仪各参数进行电泳:U:80V;A;200A;T:40min。 电泳结束,凝胶成像系统观察结果。 做实验需要注意的一点就是要戴手套操作,保护好自己。像如果用的核酸染料是EB、缓冲液是TAE的话,就要更加小心了,那玩意儿致癌性比较强;像我们用的是GoldViewTM 核酸染料和TAE还不是特别要紧。 还有就是,这里说的40ml制的一般都是25孔的中胶,你要根据所需要的孔数来按比例调节用量。胶不能制的太厚或者太薄,二者都不利于电泳的。 煮胶的时候,一定要让胶完全溶解(拿起来对着光照看,没有亮亮的小点出现),不然跑出来的胶不好看;煮的时间也不能太长,煮久了对样品的回收这类的可能有影响的。

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1.选择合适的Marker 2. 配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种,且浓度一致(1倍) 3. 点样时要加入loading buffer,并注意,不要将样点到点样孔之外(飘样),也不要将胶戳漏(漏样) 4. 根据片段大小,及电泳检测目的,选择合适的电压及电泳时间 5. EB染色。可选择制胶时加入EB(要在溶玩胶后,且温度至室温时(用手握住制胶容器,不烫手即可));或电泳结束后,将胶放入EB溶液中染色。
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