用鸡胚制备培养鸡胚成纤维细半领胞。
实验材料 9 日龄鸡胚
试剂、试剂盒 70% 乙醇胰酶／EDTA无添加 MEM 培养基完全 MEM-10 培养顶基
仪器、耗材 无菌解剖剪无菌镊毫英排觉事食拉顾绿穿子100 cm2 无菌培养皿10 ml 注射器无菌胰酶消化瓶（带磁力搅拌棒）CO2 培养箱500 ml 烧杯纱布 Sorvall 离心机250 ml 离心管150 cm2 组织培养瓶
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1. 将 10 只 9 日龄鸡胚有空气部分朝上放置，任喷上 70% 乙醇。
2. 用无菌的解剖剪将鸡蛋的顶部打开，剪掉膜上蛋壳，使膜保持完整。用无菌镊子将膜取掉。其他鸡蛋亦重复相同操作。
3. 取出鸡胚，放入无菌的 100 cm2 培养皿。
4. 剪掉每个鸡胚的头和足，将剩余的身体放入无菌的 100 cm2 平皿中，加入 10 ml 无添加剂的 M责底志多方见EM 培养基。通过 1轴翻矿侵0 ml 注射器（5 个鸡胚/注射器）挤压，将鸡胚切碎并打人无菌的胰快晶坏门酶消化瓶中。
5. 加入 100 ml 37℃ 的胰酶/EDTA，并在加湿格的 5% CO2 培养箱中 37℃ 持续搅拌温育 5 min。
6. 将液体从无菌胰酶消化瓶中倒人杯口带两层纱布的 500 ml 烧杯，将过滤后的液体转移至 250 ml 离心瓶中。
7. 左钟临来费垂向含有剩余组织的无菌胰酶消阳正亲益应体企础化瓶中加入 100 ml 新鲜的胰酶/EDTA，37℃ 温育。
8. 将消化液倒入另一个杯口带两层纱布的 500 ml 烧杯，并将过滤后的液体加入先前的 250 ml 离心瓶中。
9. 在 Sorvall RC-3B 离心机中，4℃，1200 g 离心 10 min组阶江。
10. 丢弃上清呼赶校，加入 10 ml MEM-10 完全培养基，反复抽吸 10～15 次重悬沉淀，并将体积调整至 100 ml。
11. 将悬液转移至 250 ml 离心瓶中，4℃，销块配著错连校足1200 g 离心 10 min。
1参基题封丰乙静特跑2. 用 5 ml MEM-10 完全培养基重悬沉淀，并将体积调整至 30 ml。
13. 将细胞悬液按每瓶 1 ml 加入到 30 个含有 30 ml MEM-10 完全培养基的 150 cm2 组织培养瓶中。
14. 37℃ 培养几天直至细胞长满，然后将培养瓶转移至加湿的 5% CO2 培养箱中 31℃ 保存。
CEF 细胞培养液能够在 31℃ 保存 2～3 个星期。原代
