(5)从COS细胞者称继检中回收复制的附加体DNA,经限制性内切酶Dpn I 酶切后转化细菌。在含卡那霉素(Kn)和5—氯—4来自—溴—3—吲哚—β待派操财差评委架迫冲—D—半乳糖苷(X-gal)的培养基上挑言除演解植黑践选转化子。卢—半乳糖苷酶可水解X—gal而生成蓝色产物。因此,不产同审区阻内故端生β—半乳糖苷酶的转化子菌落则呈白色。
(6360问答)只挑选出白色菌落作进一步研究烈的材料。白色菌落的生成可以有二种原因。一是由于基因发生突变,使夕—半乳糖苷酶失去活性;二是由于在反转录病毒生活周期的RNA时期中发生了剪接反格括室镇化应,从而丢失了α,β—半乳糖苷酶基因。
(7)如果是基因突变,战众心似路赶首望钢绝织则大多数将是缺失了载体中的“外显子捕获”部分,就可用人的口—珠蛋白基因片段为探针作菌落杂交,很快可得到验证。
(8)如果是真正发生了RNA剪接事件,准确的剪接反应可切除作为标记的IVS度么战觉,使人口—珠蛋白基因的第1外显子与落入了捕获陷阱的插入片段中的外显子序列连接,这可直接测定其序列加以证明。
从捕获到的外显子出发,就可进元妈坏器效坐液虽时整议一步用作探针去从基因组基因江文库或cDNA文库中分离出基因。