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构建带有报告基因增强绿色荧光蛋白(EGFP)的人骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)真核表达载体.方法 通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法从人外周血淋巴细胞中扩增出骨形态发生蛋白-2 (BMP-2)基因,构建BMP-2基因和报告基因EGFP真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,经PCR、酶切、测序等方法进行鉴定,紫 外分光光度计测定质粒浓度及纯度.结果 真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2酶切后显示空载体和hBMP-2基因片段长度分别为5.3 kb和366 bp,PCR扩增hBMP-2基因片段长度366 bp,紫外分光光度计测定空载体和含hBMP-2基因的质粒浓度分别为382 mg/L和383 mg/L,测序证实pIRES2-EGFP-hBMP-2载体序列正确.结论 成功构建真核表达载体pIRES2-EGFP-hBMP-2,可为后续骨修复的基因治疗研究奠定基础.
