求原核表达详细步骤

说起来容易做起来就要摸索了，基本步骤：目的基因的扩增→载体与目的基因双酶切→电泳→割胶回收→目的基因与载体的连接反应→重组体筛选→验证重组体→转化入大肠杆菌进行表达。问题在于：目的基因如何获取，扩增策略的决定，表达载体的选择，双酶切选择哪一对限制性内切酶，如何筛选重组体等等。