以下使用方法希望对你有用:
1. OligoDNA是以OD260为单位来计量的,是指在1ml体积1cm光程标准比色皿中
,260nm波长下吸光度为1A260nm 的Oligo溶液定义为1OD260单位
。根据此定义,1OD260单位相当于33µg的OligoDNA,您
可根据此数据和您的OligoDNA分子量计
360问答算得到摩尔数,以此计算不同摩尔浓度的溶液。2. 引物合成公司提供的序列报告中分子量计算公式
应领优介如下: MW=(A碱基数×3
预视越率说12)+(C碱基数×288
答当鸡感万们上犯请很衡)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61。例如 :TGGGCGGCGGTGGTGTTAC
GT MW=(1×312)+(3×288)+(11×3
28)+(6×303)-61=654
渐年改女参13. OligoDNA的分子量还可以用以下近似方法计算: Oligo
客矛很光减先远认画DNA中的每个脱氧核苷
析钱抗酸碱基的平均分子量近似
露征某灯当为324.5,则
轮斗笔春乐市局概快章粉一条OligoDNA的分子量=碱基数×324.5。例如,您得到一管标为
丝1OD260nm的20 个碱基OligoDNA分子量=20
树既积步×324.5=6490质量数=1×33=33µg摩尔数=3
秋几自局样令翻下局3/6490=0.0051µm
找初搞条上获保倍差优ol4. 引
物在出厂时都标有1OD 相当于多少µmol 的计算结果,进行稀释时的引物加水
量可以按以下公式计算: 稀释成100pmol/µl时:1OD引物的加水
量(µl)=1OD相当于µmol 数×10000例如:您拿
号情我八到的引物DNA合成报告单上标有1OD≈0.0035µmol,包装量是1OD/管,如
果您希望将引物浓度定为100pmol/µl(µ
mol/L),那么只需用35µl无核酸酶的双蒸水将1OD的引物干粉溶解
续仍检哥我领简帮调吸略即可。5. 由于OligoDNA呈很轻的干膜状附在管壁上,打开时极易散
包松矿世影效确凯陈失,所以打开管子前请先离
面析他想乙均研效居望顾心,然后再慢慢打开管盖,溶解时请加足量
水后盖上管盖,充分上下振荡5-10分钟。6. 需对OligoDNA作电
是齐族针甚台介型流斤泳分析,必须采用含7M尿素的聚丙烯酰胺凝胶电泳和1倍TBE Buffer,琼脂糖电泳不适于O
卷父之ligoDNA电泳,另外为防止加样时的扩散和二级结构影响,样品上样前必须加饱和尿素处理再上样。7. OligoDNA的5’端和3’端均为羟基,若需磷酸基团的则要另外再处理或直接在合成时于5’和3’端标上磷酸。8. 由于溴化乙锭对单链寡聚DNA的染色效果与DNA的结构和长度关系密切,相等OD值的不同OligoDNA样品染色后深浅可大不相同,若电泳后EB染色不出现条带或出现的条带很浅,您可将电泳凝胶于荧光板上再在紫外灯下观察,往往会看到明亮的绿色荧光背景下清晰的黑色条带;若无此条件,也可用紫外分光光计度对OD值进行检测。9. 干粉状态的OligoDNA可长期贮存。溶解后建议分装成若干管,-20℃保存,用一管取一管。溶解后的引物4℃保存不超一周为宜。