加双缩脲试剂a不变色，后加双缩脲试剂b生成紫色沉淀。
双缩脲反应的实质是：在碱性条件下，铜离子Cu2+与酰胺键（也就是高中所说的“肽键”）反应生成紫红色复合物。
所谓双缩脲是由两分子尿素经脱氨缩合而成的化合物。该化合物在碱性溶液（先滴入的NaOH）中能与CuSO4反应产生紫色络合物，此反应称双缩脲反应。蛋白质分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键，因此也能起双缩脲反应，生成紫色络合物。
扩展资料：
双缩脲试剂A是质量分数为0.1 g/mL的NaOH水溶液；
双缩脲试剂B是质量分数为0.01 g/mL的CuSO4水溶液。
先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL，振荡均匀（营造碱性环境），再加入1～2滴双缩脲试剂B，振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。
蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
参考资料来源：
