琼脂糖凝胶怎么配制?

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你好,琼脂糖凝胶的配制是分子实验室比较基本的操作,因此正确地操作对整个实验来讲很有必要,大体流程如下:称量、熔胶、倒胶、拔梳。 1.称量 我们通常所说的0.8%、1%的胶都是指的质量体积分数,即所称取的琼脂糖粉的质量(g)比所加的TBE缓冲液的体积(mL)即胶的浓度。缓冲液的体积根据胶板的大小而定。如小胶板0.8%的胶需要琼脂粉0.104g,TBE13mL。 2.熔胶 将所称量的琼脂粉与TBE在锥形瓶中混合,在微波炉内反复加热2~3次至琼脂粉溶解并无气泡。 3.倒胶 干净的胶槽内摆好梳子,往胶内滴加1uL左右核酸染料,混匀,待冷却至不烫手,轻轻倒入胶板内。 4.拔梳.待大约20min后,轻轻拔掉梳子(若不好拔,可以滴加适量的TBE缓冲液)。

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有不同的浓度:1%、1.2%、2%、3%等 一般用1%浓度的凝胶用来分离几百到几千bp大小的DNA。 称好琼脂糖后,放入TAE或TBE buffer中,用微波炉加热溶解,冷却至55 ℃时,加入少量EB或替代物,倒入模中,冷却凝固。
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