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免疫共沉淀原理及步骤
免疫沉淀(Immunoprecipitation,IP)原理
IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“proteinA/G"特异性地结合到抗体(免疫球蛋白)的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用proteinA/G预先结合在argarosebeads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的proreinA/G就能达到吸附抗原的目的。通过低速离心，可以从含有目的抗原的溶液中将目的抗原与其它抗原分离。
免疫沉淀实验的操作步骤比较多，同时由于在非变性条件下进行实验，所以要得到一个完美的实验结果，不仅需要高质量的抗体，同时对免疫沉淀体系也需要有严格的控制指标。免疫沉淀实验从：蛋白样品处理；抗体-agarosebeads孵育；抗体-agarosebeads复合物洗涤到最后的鉴定，每步都非常关键，需要严格控制实验流程中每个关键步骤的质量，才能最终达到你的实验目的。
IP实验步骤
基本实验步骤(1)收获细胞，加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)，冰上或者4℃裂解30min，12,000g离心30min后取上清；(2)取少量裂解液以备Westernblot分析，剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50μlproteinA/G-beads加入到细胞裂解液，4°C缓慢摇晃孵育过夜；(3)免疫沉淀反应后，在4°C以3,000g速度离心5min，将proteinA/G-beads离心至管底；将上清小心吸去，proteinA/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3－4次；最后加入15μl的2×SDS加样
