方法提要
在pH为1.5～2.0的溶液中，2，3-二氨基萘选择性与四价硒离子反应生成苯并(a)硒二唑化合物，为绿色荧光物质，由环己烷萃取，进行荧光光度法测定。水样需先经硝酸-高氯酸混合酸消化，将四价以下的无机和有机硒氧化为四价硒，再经盐酸消化将六价硒还原为四价硒，然后测定总硒含量。
本法最低检测质量为0.005μg。取20mL水样测定，检测下限为0.25μg/L。
20mL水样中存在下列含量的元素不干扰测定:砷30μg、铍27μg、镉5μg、钴30μg、铬30μg、铜35μg、汞1.0μg、铁100μg、铅50μg、锰40μg、镍20μg、钒100μg和锌50μg。
仪器和装置
荧光分光光度计或荧光光度计。
磨口锥形瓶100mL。
分液漏斗(活塞勿涂油)25mL和250mL。
电热板。
水浴锅。
首次使用的玻璃器皿，均须以(1+1)HNO3浸泡4h以上，并用自来水、纯水淋洗洁净;用过的玻璃器皿，以自来水淋洗后，于5g/L洗涤剂溶液中浸泡2h以上，并用自来水、纯水洗净。
试剂
高氯酸。
盐酸。
硝酸。
氢氧化铵。
硝酸+高氯酸(1+1)。
EDTA溶液(50g/L)称取5g乙二胺四乙酸二钠于少量纯水中，加热溶解，冷却后稀释至100mL。
盐酸羟胺溶液(100g/L)。
精密pH试纸pH为0.5～5.0。
甲酚红溶液(0.2g/L)称取20mg甲酚红溶于少量纯水中，加1滴氢氧化铵完全溶解，加纯水稀释至100mL。
混合试剂取50mL乙二胺四乙酸二钠溶液、50mL盐酸羟胺溶液及2.5mL甲酚红溶液，加纯水稀释至500mL，混匀，临用前配制。
环己烷不得含有荧光杂质，必要时需重蒸。用过的环己烷重蒸后可再用。
2，3-二氨基萘溶液(1g/L，此溶液需在暗室中配制)称取100mg2，3-二氯基萘(DAN)于250mL磨口锥形瓶中，加入100mL0.1mol/LHCl，振摇至全部溶解(约15min)后，加入20mL环己烷继续振摇5min，移入底部塞有玻璃棉(或脱脂棉)的分液漏斗中，静置分层后将水相放回原锥形瓶内，再用环己烷萃取多次(次数视DAN试剂中荧光杂质多少而定，一般需5～6次)，直到环己烷相荧光最低为止。将此纯化的溶液贮存于棕色瓶中，加一层约1cm厚的环己烷以隔绝空气，置于冰箱内保存。用前再用环己烷萃取一次。经常使用以每月配制一次为宜，不经常使用可保存1年。
硒标准储备溶液ρ(Se)=100μg/mL见81.36.1。
硒标准溶液ρ(Se)=0.0500μg/mL将硒标准储备溶液用HCl稀释，储于冰箱内备用。
分析步骤
吸取5.00～20.00mL水样及0mL、0.10mL、0.30mL、0.50mL、0.70mL、1.00mL、1.50mL和2.00mL硒标准溶液分别置于100mL磨口锥形瓶中，各标准溶液加水至与水样相同体积。沿瓶壁加入2.5mLHNO3-ClO4混合酸(勿盖塞)，于电热板上加热至瓶内产生浓白烟，溶液由无色变成浅黄色(瓶内溶液太少时，颜色变化不明显，以观察浓白烟为准)为止，立即取下。
稍冷后加入2.5mL(1+4)HCl，继续加热至呈浅黄色，立即取下。
消化完毕的溶液放冷后，各瓶均放入10mL混合试剂，摇匀，溶液应呈桃红色，用(1+1)NH4OH调节至浅橙色;若NH4OH加过量，溶液呈黄色或桃红(微带蓝)色，需用(1+4)HCl再调回至浅橙色，此时溶液pH值为1.5～2.0。必要时需用pH为0.5～5.0精密试纸检验，然后冷却。
本步骤需在暗室内黄色灯下操作。向上述各瓶内加入2mL2，3-二氨基萘溶液，摇匀，置于沸水浴中加热5min(自放入沸水浴中算起)，取出，冷却。向各瓶加入4.0mL环己烷，加盖密塞，振摇2min。全部溶液移入分液漏斗(勿涂油)中，待分层后，弃去水相，将环己烷相由分液漏斗上口(先用滤纸擦干净)倾入具塞试管内，密塞待测。
可选用下列仪器之一测定荧光强度。
荧光分光光度计:激发光波长376nm，发射光波长为520nm。
荧光光度计:根据仪器型号选择适当滤光片。可用激发光滤片为330nm，荧光滤片为510nm(截止型)和530nm(带通型)组合滤片。
由校准系列绘制校准曲线，从校准曲线上查出水样中硒的质量。
水样中硒的质量浓度计算参见式(81.9)。
注意事项
1)由于消化不完全，具荧光杂质未被完全分解而产生干扰，使测定结果偏高。消化完全后还继续加热会造成硒的损失。
2)四价硒与2，3-二氯基萘必须在酸性溶液中反应。pH值以1.5～2.0为最佳，过低时溶液易乳化;pH值太高时测定结果偏高。甲酚红指示剂有pH为2～3及pH为7.2～8.8两个变色范围，前者是由桃红色变为黄色，后者是由黄色变成桃红(微带蓝)色。本法是采用前一个变色范围，将溶液调节至浅橙色pH值为1.5～2.0最适宜。
