最佳答案
回答者：网友
了希动执永套一、样本种类:
按来源:①组织;②培养细胞
按制作方式:①石蜡片(I政露易HC-P)②冰冻片(IHC-F)③细胞片(来沙液银就玉为断ICC)
免疫组化荧光图
二、免疫组化流程图
来自免疫组化实验步骤解析01
取材
快:尽是半小时内取材完成
准:刀、剪锋利，一步到位，轻夹轻放
大小:每激官讨声杆罗1cmx1cmX02cm左右最宜
02固定
何时固定?
取材后立刻!马上!用什么固定?
4%多聚甲醛或福席走响尔马林较通用，有致志外膜用Canov液，活检用Bouin液
固定液用多少?
组织体积20倍以上最宜。量少应中途换液1-3次固定多久?
6-24h最佳。固定后尽快包埋成蜡块(蜡块可保存几年360问答时间而不影响实验结果)，固定越久所县指甚波激运需修复强度越大，越容易出现自发吧府型部足司盟给荧光及非特异性染色乱犯。
03切片
要保存简单 -温书是-选石蜡片!要速度快
--选冰冻片!
要结构度提财漂亮
--选石蜡片!
抗原不述斗县够旧掌胶质路稳定 --选冰冻片!抗原稳定
--石蜡片冰冻片皆可!
04烤片切多厚?
石蜡片3-8um，一般5um;冰冻片5-15um，一般8um
石蜡片怎么捞片?
水温40-45℃组织平整后玻片有油漆的一面贴近组织向斜上方提起
烤多久?
37℃过夜或陈极者做钟60℃1-2h
注据边意:使用防脱处理的玻片，冰冻片无需烤片
05
脱蜡至水
Step1:二甲苯(7min)
Step2:二甲苯(7min)
Step3:二甲苯(7min)
Step4:100%酒精(7min)
Step5:85%酒精(7min)
Step6:70%酒精(7min)
注:具体脱蜡时间可结合室温做调整，以组织上的石蜡脱干净为准。
06灭活
①一般组织使用3%HzO2室温孵育10min
内源性过氧化物酶在血管瘤肝赵深周温希占化冲胎盘、阑尾炎，坏死区域和急性炎症组织含量较高，这样的组织可以适当延长灭活时间
显色系统为过划清油停蛋氧化物酶(HRP)降厚独川型施兴采该系统，该步骤建议一定要做
碱性磷酸酶(AP)系统以及免疫荧光，该步可以不做
在灭活时，如组织片中出现细小且密集的气泡，表示过氧化物酶含量过高，这时用3%H2Oz溶液难以完全阻断，可以用0.5%高碘酸溶液室温条件孵育10min
07
抗原修复
抗原修复方式:
酶修复、高压热修复、微波热修复存工七考作绿。微波热修复一般都能得到很好的效果
修复液的选择:
柠檬酸盐缓冲液(PH60)和EDTA(PH80或9.0)。经验证对于大多数银评沿身飞的抗体来说后者使用效果更优
修复强度的选择:
固定时间越久，修复强度越强，旧标本修复强度强于新鲜标本
消化酶的使用:
不同的蛋白有最佳的消化酶，使用中要注意各种消化酶的最佳PH值
8封闭
05%BSA最常用
@血清，效果最全面
封闭血清与二抗同源(比如二抗是山羊抗小鼠gG，封闭液选择山羊血清)，与一抗不能同源09
抗体孵育
0单抗和多抗各有优势，按需选用
一抗4C孵育效果最佳，备选37℃1-2h
二抗需与一抗的种属、类别或亚类相匹配推荐护、山羊、绵羊等种属
0二抗/SABC一般37℃孵育30min10显色
0DAB显色液现用现配②建议镜下控制反应时间
根据显色时间的长短反向优化前期的实验条件
11
复染/返蓝
oMayerS苏木素复染(不易过染)
碱性溶液浸泡返蓝(如氨水、饱和磷酸氢二钠溶液等)
免疫荧光实验可选用DAPI等核染料复染细胞核，无需做返蓝
12
脱水透明
Step1:70%酒精(3min)
Sted2:85%洒精(3min)
Step3:100%酒精(3min)
Step4:二甲苯(3min) Step5:二甲苯(3min) Step6:二甲苯(3min)
注:免疫荧光实验，该步骤可以不做。13
封片
①DAB显色用中性树胶封片
2免疫荧光建议用抗荧光衰减封片剂
AEC显色用水溶性封片剂
