细胞破碎后,,用缓冲液提取蛋白质,用什么方法能得到蛋白质溶液而不含那些沉淀物!(离心后有杂质!)

离心后沉淀不稳定,是否应该用什么方法过滤下,要不然取得上清液 就难免有沉,影响结果。
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不知道你指的是动物细胞还是植物细胞,进行植物蛋白提取时,通常用的方法是TCA/丙酮法,即液氮破碎细胞---将粉末溶于TCA\丙酮缓冲液---然后加入蛋白酶抑制剂---离心后,得到的沉淀中包含蛋白还有细胞壁碎片等杂质,----然后加入丙酮溶液反复洗涤-----再加入蛋白裂解液(成分是尿素,硫脲,还要蛋白酶抑制剂等),该裂解液作用是将蛋白溶解----再次离心---此时沉淀中含有的蛋白已经很少,而上清中含有的多是蛋白,核酸及多糖---再加入适当体积的核酸酶除去核酸--最后上清中得到的多是蛋白。
至于楼主说的离心后沉淀不稳,是不是因为离心g和时间还不够,可以尝试一下改变条件,我们用的是20000g以上离心半小时。

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