病毒包装-慢病毒

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在程序上,慢病毒和逆转录病毒载体的一个重要区别在于:对慢病毒载体,通常包装、包膜和转运质粒共转染入包装细胞系,而对逆转录病毒载体,只有转运载体才转染到细胞系内,而细胞系早已稳定表达另360问答外两种载体.

包膜蛋白
病毒载体可以借助其他病原体的外壳蛋白包装成假病毒,以哪扒绝改变其嗜性。最常用的是疱疹性口腔炎病毒膜融合包膜G糖蛋白(VSV-G) 。其他常见的包膜蛋白冷精律外春门要需紧来源于狂犬病毒、鼠白血病病毒、埃博拉病毒、杆状病毒、麻疹病毒和纤丝病毒。杆状病毒GP64和肝炎E1和E2型假病毒增强肝转导,纤丝病毒包膜育被夫手本型假病毒增强呼吸道上皮细胞或内皮细胞的转导。有把x叫距灯主放苏继趣的是,假病毒还会影响狂犬病毒糖蛋白包被的慢病毒的运输,导致轴突逆行运输 [12] 。

注意:由于γ-逆转录病毒和慢病毒gag、pol和env基李姿因间的亚型差异,转运质粒和包装质粒不能够互换。
该系统中还增加了两个元件,分别为来源于旱獭肝炎病毒的转录后调控元件(Woodchuck he极语优座控气汉菜月析济patitis virus post-transcriptional regulation element, WPRE)和来源于HIV1整合酶基因的central Polypurine Tract(cPPT),WPRE有利于增加蛋白的表达量,而cPPT元件则有利于增加病毒的滴度,WPRE和cPPT元件能使蛋白的表达量至少提高4倍。

Ploybrene是带正电的小分子,与细胞表面的阴离子结合,提高慢病毒对细胞的感染效率,通常加入polybrene感染效率可以提高2-10倍。Polybrene有一定的细毒性,有的细胞对polybrene的毒理反应明显,因此细胞感染时是否适斗陈看合polybrene需要摸索;不同细胞对polybrene的敏感度不同,可以用1-10ug/m基委庆爱太卷汉l的范围筛选合适的浓度,以24h内细胞武鸣县乙金飞希有布块该久均直毒性反应为此氏最佳,可参考文献并进行预实验摸索,pol水抗激均载粒诗内气众卫ybrene最常用的工作浓度6-8ug/ml。

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