cck8来自详细实验步骤?

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方法/步骤分步阅读

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先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞到培养板内。

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按比例(例形比花医向裂题反号员阿如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度,一般要做3-5个细胞浓度梯度,每个浓度建议3-6个复孔。

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接种后培养2-4小时使细胞贴壁,然后加CCK试剂培养一定时间营矿犯考受算鸡音后测定OD值,制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴),OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量(使用此标准曲线的前提是实验的条件要一致,便于确定细胞的接种数量以及加入CC倒告显映地K后的培养时间。)

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在96孔板中接种细胞培调声急列良病秋走悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养一段时间(37℃,5% CO2),向每孔加入10 μL C标日触液笑马CK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数),将培养板在培养箱内孵育1-4小时。

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用酶标仪测定在450nm处的吸光度。若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v S顺经略突DS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会掌更委镇模经发生变化。

总结:

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1、先植发王食载场常倒零翻用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。

检雨用毫2、按比例 ( 例如:1/2比例 ) 依次用培养基等皇乡比稀释成一个细胞浓度梯度。

3、建议先做几个孔摸索接种细胞的数量和加入CCK试剂后的培养时间。

注意事项

果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基。

当然药物影响比较小的情况下,可以不更换头载婷专不把呢外全松培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。


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