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内容来自用户:李春雷
石蜡切片步骤按照晓峰整理的步骤进行(From徐晓峰、朱老师的“石蜡切片”方案):
1)材料的准备
在本实验室条件下推荐使用FAA(50% ethanol, 5% acetic acid, 3.7%甲醛)固定材料。
FAA固定液(100ml),室温保存:
无水乙醇50ml
冰醋酸5ml
37%甲醛10ml
水35ml
第一天:组织固定
用FAA固定,详见“石蜡切片”protocol。
第二天:脱水
Solution |time| number of changes|
50% ethanol |60 minutes|one|
60% ethanol |60 minutes|one|
*70% ethanol |60 minutes|one|
以上所有步骤中每换好一步乙醇均置于4℃冰箱等待,并不时轻摇。
*组织可在70% ethanol4℃可存放几个月
第三天:进一步脱水和浸蜡
以下所有步骤在4℃进行并不时轻摇
Solution|time|number of changes|
85% ethanol|60 minutes|one|
95% ethanol |60 minutes|one|
以下所有步骤在室温进行并不时轻摇
Solution|time|number of changes|
100% ethanol |30 minutes|two|
100% ethanol |60 minutes|two|
25%二甲苯, 75% ethanol |30 minutes|one|
50%二甲苯, 50% ethanol |30 minutes|one|
75%二甲苯, 25% ethanol+番红 |30 minutes|one|
100%二甲苯|60 minutes|two|
100% 二甲苯 + 1/4 volume Paraplast Plus (paraffin) chips|overnight|(不要摇动)|