葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
【原理】
葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase , GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase , POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧,并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。
【试剂】
1 . 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中,用 1mol/L **** ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ,用蒸馏水定容至 1L 。
2 .酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U ,葡萄糖氧化酶 1 200U , 4- 氨基安替比林 10mg ,叠氮钠 100mg ,溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中,用 1 mol/L NaOH 调 pH 至 7.0 ,用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ,置 4℃保存,可稳定 3 个月。
3 .酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中,用棕色瓶贮存。
4 .酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合, 4℃可以存放 1 个月。
5 . 12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中,加温助溶,冷却后加蒸馏水定容至 l L 。
6 . 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ,溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中,以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。 2h 以后方可使用。2 .手工操作法取试管 3 支,按下表操作。