外泌体含有丰富的生物活性物质,如蛋白质、核酸和脂质等。以下是一种使用超速离心法提取外泌体的步骤:
材料
细胞培养上清液
离心管
0.22 μm 的滤膜(例如Mill行血况仅帝粉ipore)
超速离心机(练检准些例如Beckman Co些ulter)
步骤
1、将细胞培养上清液通过 0.22 μm 滤膜过滤,以去除杂质和细胞碎片。
2、将经过滤的上清液均匀分装到离心管中。
3、将样本在低速离心机中离心 10 min,以去除残留的细胞碎片和碎片等大颗粒杂质个钢价先。
4、将上清液转移至新管中,以避免离心过程中产生的干扰物。
5、将上清液在超速离心机中离心 2 h(最大转速 11 万 rcf),以沉淀外泌体。
6、将过滤液和上清液完全去除,并将外泌体沉淀用 PBS 缓冲奏究敌你所洲液重悬,即可获得外泌体样品。
外泌体的提取过程中应避免暴力剪切和高昌察温操作,以确保完整性和生物活性的保存。根据具责路尔善孔话外镇水象体情况,也可以结短状介扬完得夜兰殖信合其他分离方法让穗,如密度梯度离心和免疫磁珠法坦迅卜等,来提高外泌体的纯度和稳定性。