请教使用QIAGEN质粒大量抽提质粒试剂盒的问题,为什么产量不高?常常只有100纳克/毫升左右.

我购买了QIAGEN公司的大抽试剂盒,质粒有6kb左右,高拷贝.抽提的过程有时候离心管上看的见沉淀,有时候看不见,可最终浓度都是不怎么高.而且我的目标是抽提30毫克质粒,请教我该怎么办,谢谢... 我购买了QIAGEN公司的大抽试剂盒,质粒有6kb左右,高拷贝.抽提的过程有时候离心管上看的见沉淀,有时候看不见,可最终浓度都是不怎么高.而且我的目标是抽提30毫克质粒,请教我该怎么办,谢谢!非常感谢你!我想问问核心部分是在转化感受态上还是培养过程上。我也是采用37度,250转培养了14h的。 展开
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回答者:网友
试剂盒方法是非常方便的实验方法之一,但有时候试剂盒会给我们的实验造成很多的困扰。
遇到这类问题,先不要将问题放在试剂盒上,首先需要确认的是你所培养的菌液上。你可以先用小提试剂盒或者手提(碱裂解方法)的确认一下,你所培养的菌液中1ml中可获得多少的质粒DNA, 然后再根据你大提的体积换算你所得的DNA总量。如果换算的总量差别不大,则需要考虑的是培养大肠杆菌的方法;如果换算的总量远远低于小提获得的量,则建议您联系QIAGEN的客服。如果是你操作的问题,一般通过客服可以解决问题;如果是试剂盒的问题,肯定集中在结合系统(硅胶柱出问题)或者溶液系统(溶液I,II,III),不过一般溶液系统出的问题可能性不大。最终确认是试剂盒的问题可以要求换货或赔偿。

另外你需要的量 30mg, 相当大;使用试剂盒也需要选择合适的,像你的情况一般需要使用mega(超大量)或giga(宏量)的试剂盒。如果下游操作不是转染级别的,自己手动配置碱裂解溶液即可节约成本也可解决问题。

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