什么来自是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾...

什么是同聚物加尾连接法(homopolymer tails joining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?
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所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源路言层视程苏朝元无低号双链 DNA 的 3’端各加上一段寡聚核苷酸,制成人工黏性末端,外源 DNA和载体 DNA分子要分别加上不同的寡聚带带非粉批核苷酸,如 dA(dG)和 dT(dC),然后在 DNA 连接酶的作用下,连接成为重组的 DNA。这种方评演法的核心是利用末端转移酶的功能,将核苷酸转移到双链 DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以 Mg2+作为辅助因子,该酶可以在突出的 3’-O志什笔价间沿段H 端逐个添加单核苷酸,如果用 C02+作辅安裂乱助因子,则可在隐蔽的或平末端的 3’-OH 端逐个添加单个核苷酸。

同聚物加尾法实际上是一种人工黏性末端连接法,具有很多优点:

(1)首先不易自身环化,这是因为同一种 DNA的两端的尾巴是相同的,所以不存在自身环化。

(2)因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端,所以连接效率较高。

(3)用任何一种方法制备的 DNA 都富立到径了学某眼可以用这种方法进行连接。

同聚物加尾法也有一些不便之处:

(1)方法繁琐;

(2)外源片段难以回收。由于添加了许多同聚物的尾巴,可能会影响外源基因的表达。

另外要注意的是,同聚物续天加尾法同平末端连接法一样,重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点。


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