免疫组化实验时已经用血清封闭了还可以再次透膜吗？对封闭的位点会有影响吗？

不可以。透膜也好，酶消化也好，抗原热修复也好，消除内源性过氧化物酶和内源性生物素也好，都要在血清封闭之前，如果你忘记了前面的步骤，可以洗去封闭液，补上必须的程序，再封闭，不洗，吸干封闭液直接加一抗。