大肠杆菌感受态细胞转化实验正负对照

转化
A.将-70 0C下保存的感受态细胞（200μl），室温下解冻后放置于冰上。
B.将友农史手缩无察例铁今ND-PUCm-T质粒D犯NA溶液（不超过50ng）或PCR产物与pUCm-T质粒的连结产物，体积不超过10μl，轻轻摇匀，冰上放置30min。
C.42 0C水浴中热击90础立底培决叫s或370C水浴中热击5min，热击后迅速置于冰上冷却3-5min。
D.向管中加入预热的1 ml LB液体培养基（不含Ampr），混匀后370C下震荡培养1小时使细胞恢复正常生长状态，并表达质粒编码的抗生素抗性基因（Ampr）。
E.取上述菌液20-100l涂布来自于含Amp的筛选平板上，正面向上放置半小时，等菌液完全干后倒置平皿370C下培养16-24hr。

对照 1：以蒸馏水代替pUC质粒DNA，其它同上。
对照 2：以蒸馏水代替pUC质粒DNA，在步骤E 中，取5μl涂布于不含Amp的筛选平板上。
计算：转化子总数=菌落数×稀释倍数×转化反应总体积/涂360问答布体积
转化频率= 转困院殖化子总数/质粒DNA量
感受态细胞总数=对照2菌落数样带斯术李非晶次生宣×稀释倍数×菌液总体积/喜计涂板菌液体积
感受超态细胞转化效率=陆法钟药识员请困转化子总数/感受态细胞总数