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1.干粉培养基原倍液的配制 1）配制过滤除菌的细胞培养基 ①阅读培养基使用说明，确定需要添加何种添加剂（如NaHCO3、L-谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等）。 ②根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，医学教.育网搜集整理并入容器。加注射用水至总体积的95%，轻微搅拌溶解。 ③加入规定量的碳酸氢钠及所要添加的物质。 ④轻微搅拌溶解，加注射用水至规定体积。 ⑤用1mol/L****溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。 ⑥用0.22μm滤膜正压过滤除菌。 ⑦溶液应在2℃～8℃下避光保存。 具体使用方法参照培养基包装袋上的说明书。 2.配制可高压灭菌细胞培养基 ①根据所需将培养基全部倒入一容器中，用少量注射用水（20℃～30℃）将袋内残留培养基洗下，并入容器。加注射用水至总体积的95%，轻微搅拌溶解。 ②在121℃、15psi下灭菌15分钟。 ③待溶液冷却至室温，加入无菌0.2mol/LL-谷氨酰胺溶液规定体积、无菌7.5%（w/v）碳酸氢钠溶液规定体积，加注射用水（20℃～30℃）至规定体积，混匀。 ④如果必要，用1mol/L****溶液或1mol/L盐酸溶液调pH至所需值。 ⑤溶液应在2℃～8℃下避光保存。 三、 提问内容：蛋白胨在培养基里起什么作用？ 回答内容： 蛋白胨属于氮源类，在培养基中主要提供氮； 灵芝接种 接种，可以在小型接种室里进行，也可以在大棚里进行，可以在大棚里临时搭建接种室。接种室大多是用塑料布围起来的一个封闭空间，建接种室的目的，也是防止杂菌侵入。 接种之前，先把消过毒的培养料集中放置在大棚里，然后用塑料布围起来，面积10到20平方米。 灵芝的菌种，可以在正规的菌种厂购买，要购买菌丝洁白，性状稳定的优质菌种。 进入临时接种室以后，将塑料布密封严实，防止含有杂菌的空气进入。 操作人员的双手，是最容易引起菌种和培养料污染的，要用75％的酒精进行擦拭消毒，在整个接种的过程中，需要经常消毒。 接种用的工具，如接种勾、镊子、接种勺等等，也要用75％的酒精进行擦拭，栽培种的外壁，在打开之前，也需要先用酒精消毒，把整个外壁擦拭一遍之后，再进行接种。 接种时，取出乒乓球大小的栽培种，打开培养料的袋口，放入袋口后，及时绑扎严实。为了防止接种不合格，可以在培养料的两头都接种。 在整个接种期间，参加接种的人员要有无菌意识，严禁吸烟、喝酒、大声说话、走动；接种要协调、熟练、轻缓、快速；各种工具不可乱放，要一直保持在无菌的容器里。 当接种的工作完成以后，工作人员退出接种室，用专用的食用菌熏蒸消毒剂，对培养料进一步消毒。 熏烟消毒，具有使用方便，点燃快速，扩散力强，全方位消毒的作用，灭菌有效率达99%以上。
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