酶链免疫吸附试验中封闭的操作步骤,及有哪些常用的封闭剂
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封闭360问答(blocking)是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低,吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙,封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥在ELISA,酶联免疫试剂盒其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白庆蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也岁闷是一种良好的封闭剂,其最大的特学介样见山维点是价廉,可轿雀液以高浓度使用(5%)。高质量的速溶食用低脂奶粉即可直接当作封闭剂使用,但由于奶粉的成份复杂,而且封闭后的载体不易长期保存,因此在试剂盒的制备中较少应用。
任玉集立调研可么北移止封闭:每孔加100μl封闭液,37℃保温2小时,用PBST洗板三次,每次3分闭物钟,(200µl、1罪坐交00µl 、100µl)。