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TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡实验原理和方法
原理：细胞凋亡中染色体DNA的断裂是个渐进的分阶段的过程，染色体DNA首先在内源性的核酸水解酶的作用下降解为50-300kb的大片段。然后大约30﹪的染色体DNA在Ca ²和Mg²依赖的核酸内切酶作用下，在核小体单位之间被随机切断，形成180～200bp核小体DNA多聚体。DNA双链断裂或只要一条链上出现缺口而产生的一系列DNA的3’-OH末端可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸化酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3’-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法一般称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3’-OH形成，很少能够被染色。
实验方法
TUNEL检测对于贴壁细胞或细胞涂片
a. PBS或HBSS洗涤一次。
b.如果细胞贴得不牢，可以干燥样品使细胞贴得更牢。
c.用4%多聚甲醛或碧云天生产的免疫染色固定液(P0098)固定细胞30-60分钟。
d.用PBS或HBSS洗涤一次。
e.加入含0.1%Triton X-100的PBS，冰浴孵育2分钟。
f.转步骤5。
TUNEL检测对于悬浮细胞或细胞悬液
a.收集细胞(不超过200万细胞)，PBS或HBSS洗涤一次。
b.用4%多聚甲醛固定细胞b.b.
