如何使用JC-1检测线粒体膜电位?

博凌科为生物科技-为你解答：线粒体膜电位的降低是凋亡的一个早期事件，5,5,6,6-tetrachloro-1,1,3,3-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide (JC-1)可用于来自流式细胞术检测线粒体膜电位的变化。正常细胞的线粒体膜电位电压较高，可形成JC-1的聚集孔各迅思体，发出红色荧光，而线粒体膜电位降低的细胞，则会360问答形成JC-1单体，发出绿色荧光。材料： 细胞悬液 完全细胞培养基 去极化药物：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydraz松士one (FCCP) in DMSO 1mg/ml JC-1储存液（溶于DMSO），分装成小包装，在－20℃可保存1年。 PBS 具有488nm激发光源的流式细胞仪，配备525－590nm带宽的滤镜。JC-1染色： 急衡态叶元用双布触新批收集2105的细特娘受清治校胞，用预温到37℃的新鲜完全培养基调整至1ml。制备阳性对照（以去极化药物处养气理过的细胞）。标本和阳性对照的输各响斗染色步骤相同。 融化1管JC-1储存液，每1ml细胞悬露液中通过边振荡边加的方式加入2.5L（终浓度：2.5ug/ml）。振荡细胞悬源武序世值福误标如席宣液直至标本形成均一的政含省红紫色。 JC-1在水相容易形互胶蒸纸候的蒸犯做文成聚集体，所以需要边振荡边加谓松事翻转叫势众。未用完的JC-1陈菜减宜法修配位不要再保存至－20℃。 37℃避光保存10分钟。 加入良足考顺端执足明2ml PBS至细胞悬液中，500g室温离心5分钟，去上清。 以0.3ml PBS重悬细胞。上机取样，注意获取细胞的速度不要250至300细胞/秒。Fig1 HL-60 cells, (A) control and (B) depolarized (treated with 100 nM valinomycin), st还反ained with 2.5 g/ml JC-1. Note the shift to the bottom and to the rig史因乱抓凯ht by cells with depolarized ***.fig2 After incubation with 2.5 g/ml 纪吃守落督春JC-1 at 37C, peri娘所东宁环杨pheral blood mononulear cells usually show a single population of monocytes, while here lymphocytes give rise to two separate peaks. This could indicate the presence of a functional heterogeneity within lymphocytes (A). Such a phenomenon, however, is not always present. Treating cells with valinomycin results in a loss of orange signal either from lymphocytes or from monocytes (B).