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内容来自用户:bairimeng11
Step 1:
0.2M磷酸缓冲液的配制：---------------------磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O) 29克双蒸馏水 加至500毫升pH调至7.4
Step 2:
戊二醛固定液的配制：
---------------------25%戊二醛 1ml双蒸馏水 4ml0.2mol/L磷酸缓冲液 5ml戊二醛最终浓度 2.5%pH值7.3-7.4
戊二醛固定剂的配方：
（a）磷酸缓冲液的配方：
A液：0.2M磷酸氢二钠贮备液：
Na2HPO4·9H2O 17.81克
或：Na2HPO4·7H2O 26.83克
或：Na2HPO4·7H2O 35.82克
加双蒸水至500毫升
B液：0.2M磷酸二氢钠贮备液
NaH2PO4·H2O 13.8克
或：NaH2PO4·2H2O 15.61克
加双蒸水至600毫升
使用时将A液40.5毫升和B液9.5毫升混合成0.2M磷酸缓冲液。（PH7.4）
（b）2.5﹪戊二醛固定液的配方：
0.2M磷酸缓冲液50毫升
25﹪戊二醛溶液10毫升
加双蒸水至100毫升
具体步骤如下：离心收集细胞，PBS漂洗两遍，双醛固定（2％多聚甲醛＋2.5％戊二醛。双醛固定对免疫电镜更加适合。）30min，PBS漂洗两遍，1％锇酸固定1h，PBS清洗3遍，用小的样品勺取出一点标本，置包埋板或小的离心管中，然后常规梯度脱水，浸透，包埋。
把细胞离心取沉淀细胞,,然后拿PBS液漂洗两遍后
