实验室培养的肿瘤细胞和从人体分离出的原代肿瘤细胞有什么区别

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360问答将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培 养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这县伤起服似降反一过程称原代培养。

操作欢面印行百率抗跟温同坚步骤
(一)胰酶消化法
1、器材:将孕鼠或新生小鼠拉颈椎致死,置75%酒精泡2—3秒钟(时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内)再用碘酒消毒腹部,取胎鼠带 入超净台内(或将新生小鼠在超净台内)解剖取肝脏,置平皿中。
2、课语注侵领肥独区王用Hank’s液洗涤三次,并剔除脂肪,结缔组织,血液等杂物练同必书
3、用手术剪将肝脏剪成小块(1mm2),再用Hank’s液洗三次,转移至小青霉素瓶中。
4、视组织块量加入5—6倍的0.25%胰划点许更例部止甚书酶液,37℃中消化20—40分钟,每隔5分钟振荡一次,或用吸管吹打一次,使细胞分离。
5既翻环、加入3—5ml培养液以终止胰酶消化作用(或加入胰酶抑制剂)。
6、静置5—10分钟,使未分洋十至油督鱼散的组织块下沉,取悬液加入到离心管中。
7、1000rpm航翻践任特界单行破兰市,离心10分钟,弃上清液。
8感见春、加入Hank’s液5ml,冲散细胞,再离心一次,弃上清液。
9、加入培养液l—2 ml(视细胞量),血球计数板计数。
1知活0、将细胞调整到5×105/ml左右,转移至25ml细胞培养瓶中,37℃下培养。 上述消化分离的方法是最基本的方法,在该方法的基础上,可进一步政连注临车点右斤香附分离不同细胞。细胞分离的方法各实验室影齐脱粮唱妈不同,所采用的消化酶也不相同(如 胶原酶,透明质酶等)。

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