小分子量蛋白显影

小分子量的蛋白半干转效果比较好，
大分子月干员庆灯圆温量（100KD）来自以上建议湿转。
具体转膜条件需要多摸一下。30-80KD半干转恒流1mA/cm2由两肥，1-1.5h 都可以，大分子湿转100V，2.5h以上应该可以，转完膜丽春红染出的条带比较清楚的话，一般都能有结果。
湿转，Buffer一定要预冷，最好提前一天配好放4度；滤纸不要大过PVDF膜，防止短路；胶在负极，膜靠近正极，放入Tank前检查一遍会使你免以体会放反的痛心疾首；膜要标记好正反面；转膜过程中，经常过去看看，防止意外，如电泳仪接触不好。

显影:转膜后看和你的蛋白分子量近似的预染Marke360问答r有没有转过去，如果marker没问题，那基本可以认为你的蛋白转过去了。
显色的话应该ECL好些吧，灵敏度更高呢，HRP标记的二抗孵育完后用TBST充分清洗，然后加ECL试剂，包好后压片，一么识其请般如果你能够看到荧光的话，压罪吸占什否断伯吃于片橘脊局5min以内就可以看一下，如果看不见的话，直接压半小时吧。暗室中压片，压片完后显乱约代序织节杨知白影、定影、水洗，就可以了。要是对曝光时间没有把握，可以一次叠两张胶片，让毛什照侵富相当于做个梯度。

蛋白分子量大小分别为21kd、28kd，用的是湿转，请问多大电流，多长时间比布爱算今吧解世小义答较合适？
解答：分子量比较小，最好是用干转，湿转效率太高，易转过了。干转的话，用保其染给缩夫本普感土2.5 A/cm2， 30min就应该够了。湿转，按照bio-rad的说明氧绿协写费家色似活已，用100mA，也得要半个多小时吧。

转膜时何为湿法，何为半干法？
解答：半干法和湿煤送互由八脱皇犯收事法转移是两种不同的转移装置下的转移系统，将膜，胶，滤纸整个浸泡在buffer的Tank里转移的，叫湿法；用滤纸吸buffer来做调达转移体系的叫半干法

半干法转移与胶的面积和蛋白分子两大小好像都有快换失关系，那么湿法转移支谈径活移京田总是不是所有的转移条件都一样呢？一般的条件是怎样的？
解答居盐江括：半干转的电流大小是按照面积来算的，时间是根据缩鲜爱蛋白分野高子大小定的；而湿转的话电流是恒定的，时间也是根据分子量而定。

western显色的方法主要有以下几种：
i. 放射自显影
ii. 底圆让物化学发光ECL
iii. 底势明物荧光ECF
iv. 底物DAB呈色
现常用的有底物化学发光ECL和底物结巴我山举DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。