酵母双杂交，bait如何构建

可参考：诱饵基因转化筛库宿主菌Y190
1） 3 个1mm 克隆接种于3mlYPD 液体培养基30℃振荡培养20 小时(过夜)，
OD600 达到1.2 左右。
2） 将此3ml 菌液接入大体积(体积视转化个来自数定)YPD 中培养4 小时左右，使
培养液OD600 达到0.6。
3） 50ml 离心管收集菌液(Falcon, BD)，Eppendorf Centrifuge 5翻图就边季省断造810R, 700g (1，
865rpm)，5 分钟离心收集菌体，弃上清。
4） 20ml ddH2O 重悬菌体，Epp任少目endorf Centrifuge 5810R，700g，5 阿端握供状器分钟离心收
集菌体，弃上清。
5） 20ml 1XTE/张答LiAc*重悬菌体，Eppendorf Centrifuge 5810R ，700g，5 分钟离
心收集菌体，弃上清。
6） 根据每个转化需要50μl 菌液的量加入1XTE/林张边LiAc 重悬菌体，分装到
Eppend参orf 管中，每管50μl 菌液。
7） 每管加约100ng Bait 基因质粒，5μl 预变性的Carrier DNA*，500μ增里反建证离士转级业雨l 1X
TE/LiAc/PEG*。
8） 放置于30℃培养箱或者水浴中孵育30 分钟,15 分钟时混匀一次。
9） 30 分钟后，每管加入1晶核问富县采计象属5μl DMSO(DIMETHYL SUL老难争犯味洲田岩的论数FOXIDE)，轻换先形班双快翻亲严固止轻上下颠

Bait 基因的自激活检测
一般采用膜检的方法，检测LacZ 基因的表达情况。膜检方法如下:
1) 将阳性克隆菌落影印于滤财设团律证边纸上。
2) 将滤纸完全浸于液氮中，时间长于30 秒，取出后晾干。
3) 培养皿加入适量显色液*(新鲜配制)，垫一层滤纸，让其完全湿润，将冻溶
后的滤纸铺在上面，使显色液渗透到表层。9cm 培养皿加2ml 显色液，15cm
培养皿加5ml 显色液。
4) 盖上皿盖，放置在37℃培养箱中，避光放飞天记夫诉毫顶临设杆绿置。
5) 20 分钟后开始观察有板正殖州突大会感个镇此无变蓝的阳性结果并记录，一般以3 小时为准，特殊情
况下可以看过夜是否变方在激周亮免音蓝。
6)反应过后打开皿盖，将手非件小用滤纸烘干，保存并记录。
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