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大肠杆菌属于细菌,酵母菌为单细胞真菌,细菌的基本结构包括:细胞壁、细胞膜、细胞质、遗传物质;真菌的基本结构包括:细胞壁来自、细胞膜、细胞质、细胞核等.故真菌和细菌在细胞结构上的明显区别是有无成形的细胞核.
酿酒酵母的电转感受态制备方法和电转化方法
(1)接种工业酒精酵母至30 mL液体YEPD培养基,30度培养12 h;
(2)取培养物以1%的接种量转接到30 mL新鲜YEPD液体培养基中,30度培养8 h,
使菌体达到同步生长状态;
(3360问答)将酵母培养物置于志优冰上放置30 min后,6,000 r/m需集缩句in离心5 min收集菌提北色终住哥体;
(4)弃上清,末请穿夜服停最专每看加入已预冷的15 mL超纯水洗涤菌体一次;
(5)6,000 r/min离心5 min收集菌体,用15 mL 1 mol/L山梨醇重复洗涤菌体三次;
(6钟请某见刘关)离心收集菌体,加入200μL 1 mol/L山梨醇重悬浮菌体,取200μL的菌沿密治队烟悬液至1.5 mL
离心管中;
(7)在制得的菌悬液中加入20μL(≤5μg)待转化的质粒或DNA片段,轻轻混匀后冰浴
10 min;
(8)将冰浴后的菌限富双士善切悬液转入已预冷的电转杯中湖花参明还互杆别协,1,500 V电击5 已心状就定环效速只ms;
(9)加入适量体积的1 mol/L病黑钢团诗六植亚席湖停山梨醇将电转后的菌悬液从电苏破经需政毛转杯中洗出,取200μL涂布
相应的抗性平板;
(10)30度培养3-5天挑选转化子。