关于真核表达载体的筛选
比如说我用pEGPF系列的载体,首先可以先用抗生素筛选出有质粒导入细胞的,但是表达出的融合蛋白依旧是有绿色荧光的,那该如何筛选出已经成功重组的质粒呢?难道说只能靠测序或者是酶切... 比如说我用pEGPF系列的载体,首先可以先用抗生素筛选出有质粒导入细胞的,但是表达出的融合蛋白依旧是有绿色荧光的,那该如何筛选出已经成功重组的质粒呢?难道说只能靠测序或者是酶切鉴定吗?错了,是pEGFP 展开
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回答者:网友
筛选载体首先看菌株,不同的类型所能使用的载体范围也是不同的,比如毕赤酵母的有些载体在酿酒酵母中就不能用,具体要多搜索
其次对于质粒的筛选,如果可能的话可以来自选择拥有2重选择的质粒,比如360问答又带抗性又带营养缺陷的,或者用蓝白斑,不论是质粒上做二重还是在你外源插入基因中再加一些Tag,如果只有这种一重选择的,可能只有把质粒重新提出来做测序或者酶切