CAT 测定方法

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内容来自用户:路之玉

实验35过氧化氢酶的活性测定 植物在逆境下或衰老时，由于体内活性氧代谢加强而使H 2 O 2累积。H 2 O 2可以直接或间接地氧化细胞内核酸、蛋白质等生物大分子，并使细胞膜遭受损害，从而加速细胞的衰老和解体。过氧化氢酶可以清除H 2 O 2，是植物体内重要的酶促防御系统之一。因此，植物组织中过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性。Ⅰ高锰酸钾滴定法一、原理过氧化氢酶能催化过氧化氢分解为水和分子氧，可根据H 2 O 2的消耗量或O 2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的H 2 O 2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H 2 O 2，即可求出消耗的H 2 O 2的量。5H 2 O 2 +2KMnO 4 +4H 2 SO 4→5O 2 +2KHSO 4 +8H 2 O+2MnSO 4
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料植物叶片。（二）试剂1．10％H 2 SO 4。2．0.2 mol/L磷酸缓冲液pH7.8。3．0.1 mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO 4（AR）3.1605 g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000 mL，用0.1 mol/L草酸溶液标定。4．0.1 mol/L H 2 O 2：30％H 2 O 2大约等于17.6 mol/L，取30％H 2 O 2溶液5.68 mL，稀释至1000 mL，用标准0.1 mol KMn0 4溶液（在酸性条件下）进行标定。5．0.1 mol/L草酸：称取分析纯H 2 C 2 O 4·2H 2 O 12.607 g（三）仪器设备二、实验材料、试剂与仪器设备